VEGFC、VEGFR3及CNTN1的表达与胃癌淋巴结转移的关系

【摘要】 目的 观察血管内皮生长因子C（VEGFC）及其受体VEGFR3与神经细胞黏附分子接触蛋白1（contactin1，CNTN1）在胃癌组织中的表达情况，并分析其与胃癌淋巴结转移和其临床病理参数间的关系。方法 56例胃癌患者按淋巴结转移情况分成：实验组（淋巴结转移阳性患者34例）和对照组（淋巴结转移阴性患者22例）。对所有肿瘤组织标本行免疫组化染色检测VEGFC、VEGFR3及CNTN1的表达，分析三者之间的关系及其与临床病理特征之间的关系。结果 实验组：VEGFC、VEGFR3及CNTN1的阳性表达率分别为67.64%、82.35%及76.47%。对照组：VEGFC、VEGFR3及CNTN1的阳性表达率分别为：40.91%、50.00%及45.45%。CNTN1的表达与VEGFC（P<0.05）及VEGFR3表达（P<0.05）存在明显相关性。三者的表达与TNM分期和淋巴结转移均有关（均P<0.05）。结论 VEGFC、VEGFR3和CNTN1三者均在胃癌组织中高表达。三者的表达情况与肿瘤的淋巴结转移和TNM分期关系密切。而且认为VEGFC促进胃癌的淋巴管生成和淋巴结转移有可能是通过CNTN1通路介导的。

【关键词】 胃癌；血管内皮生长因子；接触蛋白1

胃癌的治疗手段是手术，肿瘤淋巴道转移是术后死亡的主要原因。研究发现血管内皮生长因子C（VEGFC）和其受体VEGFR3的表达与肿瘤的淋巴管生成和淋巴结转移密切相关[1]。本课题应用免疫组化方法检测VEGFC、VEGFR3及CNTN1的表达与胃癌淋巴结转移的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本组56例标本系本院胃肠外科2010年1月～2012年6月期间接受胃癌根治术患者的胃癌组织标本，男性37例，女性19例；年龄32～76岁，中位年龄61岁。按1997年国际抗癌联盟标准行TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期14例，Ⅲ期32例。肿瘤大小按肿瘤原发灶的最长径判断，介于1.0～9.2 cm之间，中位值5.1 cm。淋巴结转移阳性者34例，淋巴结转移阴性者22例。术中所取标本均经病理学证实。

1.2 试剂 兔抗人VEGFR3多克隆抗体、兔抗人CNTN1多克隆抗体、羊抗人VEGFC多克隆抗体均购于英国Abcam公司；DAB显色剂和免疫组化链球菌亲和素生物素过氧化酶复合物法（SABC）试剂盒购于美国Santa Cruz公司。

1.3 实验方法 所有标本均制成4 μm厚的连续切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水，然后置于新鲜配制的0.3%的过氧化氢溶液浸泡，蒸馏水冲洗后用枸橼酸钠缓冲液浸泡，微波修复，PBS冲洗，血清封闭，加稀释后的一抗4℃孵育过夜，再加生物素化二抗室温孵育0.5 h，PBS冲洗，加SABC试剂室温放置0.5 h，再次PBS冲洗，DAB显色，蒸馏水冲洗苏木素复染，盐酸酒精分化。最后脱水、透明、封片、镜检。阳性对照为试剂公司提供的阳性切片，PBS替代一抗行阴性对照染色。

1.4 统计学方法 用SPSS 17.0软件行统计学处理。用χ2检验分析VEGFC、VEGFR3和CNTN1蛋白的表达与胃癌临床病理特征之间的关系，r相关分析法判断三者间的相关性。检验水准α=0.05。

2 结果

实验组：VEGFC、VEGFR3及CNTN1的阳性表达率分别为67.64%、82.35%及76.47%。对照组：VEGFC、VEGFR3及CNTN1的阳性表达率分别为：40.91%、50.00%及45.45%。CNTN1的表达与VEGFC（P<0.05）及VEGFR3表达（P<0.05）存在明显相关性，见表1。三者的表达与TNM分期和淋巴结转移均有关（均P<0.05）。

3 讨论

恶性肿瘤细胞具有异质性。研究发现VEGFC在肿瘤的淋巴管形成中起了重要作用，参与了肿瘤细胞的播散和区域淋巴结的转移[2]。国内学者认为检测VEGFC的表达可作为甲状腺乳头状癌[3]和乳腺癌[4]发生淋巴结转移的预测指标。Wang等研究发现其特异性受体VEGFR3参与了新生淋巴管的形成，肿瘤细胞的浸润和远处转移[5]。近年来，通过基因芯片技术分析侵袭性的肺癌细胞基因表达的差异性，发现CNTN1是与肿瘤侵袭相关的基因。CNTN1在胃癌组织中高表达， r相关分析发现，CNTN1与VEGFC/VEGFR3轴之间存在显著相关性。

本研究发现，VEGFC/VEGFR3轴在胃癌组织的淋巴管生成和淋巴转移过程中具有重要作用。同时，CNTN1蛋白表达还与VEGFC及VEGFR3蛋白表达相关，提示CNTN1或许是VEGFC/VEGFR3轴作用通路上的一个重要分子，可能参与了肿瘤的淋巴管生成及淋巴结转移，这一过程的具体机制，需要以后更深层次的研究。

参 考 文 献

[1] Albuquerque RJ， Hayashi T， Cho WG， et al. Alt ernatively spliced vascular endothelial growth factor receptor2 is an essential endogenous inhibitor of lymphatic vessel growth.Nat Med， 2009， 15（9）：10231030.

[2] Da MX，Wu XT，Wang J，et al. Expression of cyclooxygenase2 and vascular endothelial growth factorC correlates with lymphangiogenesis and lymphatic invasion in human gastric cancer.Arch Med Res， 2008， 39（1）：9299.

[3] 吴立刚，刘奇伦，胡志强.MMP2 和VEGFC 在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义.中国普外基础与临床杂志，2009，16（11）：906910.

[4] 黄桂林，侯吉学，吴毅平.乳腺癌患者血清VEGFC水平与癌组织CerbB2蛋白的表达及临床意义.中国普外基础与临床杂志，2009，16（7）：514517.

[5] Wang XL，Fang JP，Tang RY，et al. Different significance between intratumoral and peritumoral lymphatic vessel density in gastric can cer：a retrospective study of 123 cases.BMC Cancer， 2010（10）：299310.