不同微生物菌剂对田间西红柿品质以及土壤酶活性的影响

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1.1 实验材料西红柿S18-02幼苗由上海师范大学种质资源中心提供，贝莱斯芽孢杆菌S3-1（B.velezensis）与桔黄假单胞菌JD37（P.chlororaphis subsp.aurantiaca）由上海师范大学微生物与分子生物学实验室保藏.实验试剂包括：铬天青S（Chromeazurol S）固体平板，NBRIP溶磷固体培养基，ADF培养基，无菌脱脂牛奶培养基，salkowski试剂，Luria-Bertani（LB）液体培养基，Kings Medium B（KMB）液体培养基，高氏一号培养基，孟加拉红培养基，牛肉膏蛋白胨（NB）培养基.

1.2 菌种性质鉴定[10-11]将4 ℃下保藏在平皿中的S3-1与JD37分别接种至LB液体培养基与KMB液体培养基中，活化24 h后得到种子液.接种至新的LB与KMB培养基中再培养24 h后得到发酵液，用移液枪小心地吸取1 μL发酵液點于CAS固体平板、NBRIP溶磷固体培养基上，观察其是否是产铁载体和其溶磷的能力.将上述溶液进行梯度稀释后吸取100 μL均匀地涂布在ADF培养基（培养基现配现用，无法加热重复使用）中，若干天后观察是否有菌落产生.利用salkowski法测定细菌产吲哚乙酸（IAA）的能力.

1.3 菌株生物信息学分析将S3-1和JD37分别与已有文献中证明具有植物促生能力的芽孢杆菌与桔黄假单胞菌根据16S rDNA构建系统发育树，以便对其应用潜力进行分析.

1.4 大田实验设计于2018年4月—7月开展大田实验.大田共分为6块，每块面积为1.5 m×3.5 m，纵向间隔35 cm移栽一株西红柿幼苗，横向间隔30 cm移栽一株西红柿幼苗，每块地共移栽45株幼苗，总计移栽幼苗180株（图1）.按上文方式活化S3-1与JD37后，以1%的接种量接种于新的LB与KMB液体培养基中，过夜培养24 h，得到发酵液.空白对照使用未经接种的LB与KMB液体培养基.将两者均以1∶50的体积比加水稀释[12].每隔7 d以灌根的方式对西红柿进行菌液浇灌，每天在每块地块定量浇水10 L以保持土壤湿润.

1.5 西红柿根际可培养微生物数量及其根长、株高和植株干重的测定种植前采集土壤样品A，待到西红柿成熟时将西红柿植株连根拔出，收集其根系土壤B[13].将1 g土壤置于9 mL无菌水中，震荡均匀，再取1 mL溶液至9 mL无菌水中，该过程重复3次，分别制备成体积分数为1×10-3与1×10-4的混悬液α，β.用移液枪取100 μL混悬液β分别涂布于NB固体培养基与高氏一号固体培养基上，计数细菌与放线菌;吸取100 μL混悬液α涂布于孟加拉红固体培养基，计数真菌数量;待菌体形成明显菌落后，记录菌落数[14].

通过以下公式来观察不同处理组西红柿根际可培养微生物数量的变化：其中，C为变化率，a为土壤A中的微生物数量，b为土壤B中的微生物数量.将西红柿植株在烘箱内以105 ℃恒温烘干至恒重后测量其根长、株高和干重.