ＣＤ４４ｖ３基因蛋白在鼻咽癌中的表达以及与肿瘤转移的关系

【摘要】 目的研究粘附分子CD44变异型-3（CD44v3）在鼻咽癌中的表达和肿瘤浸润、转移的关系。 方法采用免疫组化两步法检测鼻咽癌组中CD44v3蛋白在鼻咽癌和正常组中的表达差异，以及和鼻咽癌临床特征的关系。 结果鼻咽癌组中CD44v3蛋白阳性表达率高于对照组（ P <0．001），表达强度随着鼻咽癌的局部浸润程度、淋巴结转移扩大及TNM临床分期增加而增强，相关系数在0．303以上（ P <0．05）。 结论CD44v3可能和鼻咽癌的浸润、淋巴结转移及临床分期有关。

【关键词】黏附分子CD44变异型-3；鼻咽癌；肿瘤侵袭和转移

The relationship of CD44v3 in nasopharyneal carcinoma and in cancer metastasis.

XU Wei-hua,FU Ya-feng,CUI De-wei，et al.Department of ear-nose-throat(ENT)surgery,the Affiliated hospital of Guang dong Medicine College,Zhan jiang 524000,China

【Abstract】 ObjectiveTo investigate the high expression of Cellular adhesion molecule CD44 variant isoforms3 (CD44v3）innasopharyngeal carcinomaandwhether theyhave relation with the cancer invasion and metastasis. MethodsControl trial was adopted in the experiment design.Immunochemistry (two steps) was used to detect the expression of CD44v3 in nasopharyngeal carcinoma and normal nasopharyn membrane. ResultsThepositiveexpression rate of CD44v3 protein in nasopharyngeal carcinoma was85．71%,which was obviously higher than that of normal nasopharyn membrane (4．65%),the difference between thetwo group havestatistical significance ( P <0．01). ConclusionThe positive expression ofCD44v3 protein surely have relationwiththe cancer sectional limp node metastasis and clinical staging.

【Key words】Nasopharyngeal Carcinoma;Invasionand Metastasis;CD44variantform3

黏附分子CD44v3，是细胞粘附分子CD44变异型中的一个，介导细胞和细胞外基质之间的相互作用，参与肿瘤细胞的增殖、分化、粘附、迁移及肿瘤血管形成等重要过程，在肿瘤的发展和转移中起重要作用^[1]。CD44v3在鼻咽癌中的研究国内外尚未见报道。本研究采用免疫组化法探索该因子在鼻咽癌中的情况。

1 材料与方法

1．1 病例标本 本研究112例标本均来自广东医学院2006年1月至2007年1月门诊就诊患者，男62例，女50例，最小年龄18岁，最大年龄88岁。取正常鼻咽黏膜组织90例作为对照组。鼻咽癌的临床分期标准为1992年福州鼻咽癌会议达成的标准 ^[2]。

1．2 试剂 鼠抗人CD44v3单克隆抗体，DAB显色试剂盒PV-6002小鼠两步法试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1．3 方法 标本以10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片5 μm厚。采用免疫组化两步法，按照试剂盒说明书的步骤进行操作，切片经过柠檬酸缓冲液（pH=6．0）高压热修复抗原处理。PBS 替代一抗作为阴性对照，已知CD44v3 阳性的乳腺鳞癌组织作为阳性对照。

1．4 结果判定 CD44v3阳性判定 细胞膜出现棕褐色颗粒为阳性。每张切片在400倍光镜下观察10个镜野，每个视野计数100个肿瘤细胞，共计1 000个细胞，且每张切片阳性细胞百分数>10%为阳性，≤１０%为阴性．以文献^[3]标准评定强度。

1．5 统计学方法 计数资料组间差异比较采用四格表 χ²检验、行乘列表Spearman 相关性分析。统计分析采用SAS8．0软件。

2 结果

2．1 CD44v3阳性率在鼻咽癌组中为85．71%（96/112）；正常人鼻咽黏膜组中阳性率为4．65%（4/90）。CD44v3在鼻咽癌组高于正常人鼻咽黏膜组（ P <0．01）。CD44v3 鼻咽癌组与正常对照组的差异详见表1。

2．2 CD44v3蛋白表达与肿瘤浸润深度成正相关 r =0．330 P =0．001 ；CD44v3蛋白表达与肿瘤淋巴结转移程度成正相关 r =0．332P =0．001 ；CD44v3蛋白表达与肿瘤TNM 分期成正相关 r =0．303P =0．001。详见表2。

3 讨论

CD44是一种细胞表面跨膜糖蛋白黏附分子，其基因位于11号染色体的短臂上，由20个外显子组成，其中10个是组成型外显子，10个ｖ区变异性拼接外显子，全长大概50kb^[4]。 由于V区外显子在m RNA 水平的选择性拼接，产生多种CD44变异体。主要包括CD44v3、CD44v5、CD44v6、CD44v9等^[5]。黏附分子CD44v3，是细胞粘附分子CD44变异型中的一个，介导细胞和细胞外基质之间的相互作用，在肿瘤的发展、转移中有密不可分的作用。研究发现CD44v3与细胞外基质中透明质酸的酶解产物结合来参与肿瘤细胞的增殖、分化、粘附、迁移及肿瘤血管形成等重要过程，在肿瘤的发展和转移中起着重要作用^[6]。其可能的机制有：①CD44是淋巴细胞归巢受体,能与细胞外基质的多种成分结合(如透明质酸等),发挥其生理功能。依照CD44的生理功能,可以推测CD44v介导肿瘤转移的机制为CD44v表达阳性的癌细胞模仿淋巴细胞执行了细胞-细胞和细胞-基质的相互作用,这些相互作用为肿瘤扩散所必须^[7]。研究表明，在肉瘤和结肠癌患者中，CD44v8-10阳性患者较阴性患者预后差^[8-9];②CD44v与细胞外基质中的配体结合,导致细胞形态和游动性发生改变,参与了肿瘤细胞的浸润过程;③通过与远隔血管和淋巴管内尚未查明的配体结合,使转移至那里的癌细胞更稳定地寄宿,集落生长,有效地形成转移瘤，这在黑色素瘤中得到证实^[10]。辛榕等用免疫组化法发现，在骨肉瘤患者有淋巴结转移组中阳性表达高于无淋巴结转移组，提示CD44v3在肿瘤转移中有意义^[11]。CD44v3在胆囊癌的阳性表达高于良性病变组；有淋巴转移原发癌组织中CD44v3表达高于无淋巴转移者；CD44v3在胆囊癌临床I~Ⅱ期的表达低于Ⅲ一Ⅳ期^[12]。Pif-fko和Yokozaki等发现CD44(v6)的研究发现在口腔的不典型增生病变中是高表达，但是在口腔鳞状细胞癌中却低表达或无表达^[13-14];因此推测CD44v3可能在身体不同部位的肿瘤中表达情况不尽相同，作用也不尽相同 。

在本次研究中发现，CD44v3分子鼻咽癌患者中阳性表达率高于对照组，两者差异有统计学意义， P <0．01； CD44v3的表达其强度和鼻咽癌局部浸润程度、淋巴结肿转移程度、鼻咽癌患者的TNM分期正相关，相关系数分别为0．330、0．332、0．303，且相应p值均有统计学意义。故可以推断CD44v3分子在鼻咽癌中对肿瘤细胞转移起到一定积极作用。这个结果和该分子在其它肿瘤研究中的结果一致。考虑到鼻咽癌的复发往往是潜在的、临床不易发现的转移灶存在的结果。如果在治疗的同时注意防止肿瘤转移的可能环节，对提高治疗效果有所帮助。目前在这方面的研究探索已经展开了，马丹等已经在肺癌中用RNAi干扰CD44v3表达，造成该分子的低表达，结果发现CD44v3低表达的癌细胞穿透人工基地膜的能力明显要低于对照组^[15]，这不但直接证明了CD44v3对肿瘤细胞的侵袭促进作用，而且提出了新的对抗肿瘤细胞转移的治疗途径。再如肝素就可以和CD44v3结合，抑制透明质酸及其分解产物对CD44v3的结合，从而达到抑制肿瘤细胞的转移。这里提示给CD44v3分子阳性的鼻咽癌患者放疗的同时给予肝素治疗也有可能提高疗效。但是到底有多大临床意义还有待于临床治疗观测。在临床上检测CD44v3阳性表达至少也可以作为预后不佳的参考。

综上所述，可以认为CD44v3在鼻咽癌中的表达和鼻咽癌的局部浸润程度、淋巴结转移程度及TNM分期有明显相关性，对鼻咽癌患者的预后可能有一定预测意义。针对CD44v3在鼻咽癌的治疗上，可以用相应的选择性抑制剂给予辅助治疗，可以有效地提高疗效、改善预后。

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