Caspase—3,在大鼠心肌缺血后12h的表达

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摘要：目的 探讨Caspase-3 在大鼠心肌缺血后12h的表达，以探讨其在急性心血管病方面的诊断意义。方法 采用结扎冠脉左前降支的方法复制大鼠心肌缺血模型，观察心肌梗死情况，检测Caspase-3 的表达。结果 大鼠心肌缺血后12h出现梗死灶，Caspase-3 明显表达。结论 Ccaspase-3 与大鼠心肌缺血情况密切相关，早期检测可以为心肌缺血早期病情变化提供有用的信息。

关键词：Caspase-3 ；心肌缺血；早期检测

心肌梗死病情进展迅速，能否及早准确判定疾病发展趋势， 对能否及时有效的治疗至关重要。近年来的研究表明，其中主要的发病机制之一是细胞凋亡[1]。细胞凋亡是由基因控制的细胞主动死亡过程，Caspase-3作为细胞凋亡的指标在其心肌缺血细胞凋亡过程起重要作用。为了探讨Caspase-3早期检测是否可以为心肌缺血早期病情变化提供有用的信息，我们观察了大鼠心肌缺血2h后再灌注12h的Caspase-3表达情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择成年健康雄性SD大鼠45只，体重250～280 g。由上海市西普尔-必凯实验动物中心有限公司提供，许可证号：SCXK（沪）2008-0016。从45只大鼠中随机选出30只分为正常组、假手术组、模型组三组，每组各10只。

1.2 主要试剂 氯化2，3，5-三苯四氮唑（TTC）（2，3，5一Triphenyltetrazolium Chloride，TTC），美国Sigma公司，用双蒸水配成2%浓度；水合氯醛，北京鼎国生物公司产品，用双蒸水配成10%浓度。

1.3 方法 血清hS-CRP，Caspase-3 采用化学发光免疫法，心肌缺血12h后腹主动脉取血检测。

1.4 动物模型制作 模型组用10%的水合氯醛（360mg/kg）腹腔注射麻醉后，采用李仪奎方法，左胸常规消毒后，于左第3～4 肋间开胸，剪开心包膜，挤出心脏，在左心耳和肺动脉圆锥之间距左冠状动脉根部2～3mm处，用6-0手术线结扎冠脉左前降支（假手术组仅穿线不结扎），迅速将心脏送回胸腔，闭胸，以结扎部位以下心肌变白，搏动减弱作为造模成功标志。死亡及不符合标准的动物剔除并随机补充，保证每组10只成功模型。

1.5 TTC标本取材及染色 正常组、假手术组和模型组三组大鼠在术后12h用10%水合氯醛（360mg/kg）腹腔麻醉，腹主动脉取血后取材，剖取心脏，用冰生理盐水洗净残血，滤纸吸干，称重，去除心房及脂肪组织，将左心室横切成1～2mm厚的薄片，置于2% TTC溶液，37℃避光孵育30min。梗死区为白色，正常心脏组织被染成玫瑰红色。至梗死区界限清晰时取出，分离心肌梗死区，用滤纸吸干，称质量，计算心肌梗死率。心肌梗死率=心肌梗死区质量（g）/全心质量（g）×100%.

1.6 统计学处理 所获数据均为正态分布，采用x±s表示，SPSS18.0 统计软件进行单因素方差分析和t 检验。

2 结果

3 讨论

Caspase 家族是细胞凋亡过程中重要的蛋白酶；Caspase-3 是半胱天冬酶家族成员之一，参加细胞凋亡信号，它是各种细胞凋亡蛋白酶级联反应的必经之路，是凋亡的关键酶和执行者，故又称之为"死亡蛋白"[2]；在各种程序启动的凋亡程序中起最后枢纽的作用，促使细胞凋亡。有学者认为，Caspase-3 是心肌缺血预后的一个较有价值的指标， 可以独立预测心肌梗死的死亡率及其心脑血管病变的发生率[3]。

本实验显示模型组较正常对照组和假手术组比较有统计学意义（P<0.05）。提示心肌梗死存在炎性反应，导致血清Caspase-3水平升高。作为较可靠和灵敏的急性时相反应指标，血清Caspase-3水平与心血管病密切相关。

综上所述， 心肌梗死的恢复转归同治疗时机密切相关，及时了解心肌梗死发病趋势，早期诊断采取有效治疗是心肌梗死病情控制的前提，血清Caspase-3水平将对缺血性梗死的诊治更有指导意义。心肌缺血大鼠测定血清Caspase-3浓度的意义在于为评价心血管病病情的早期诊断提供有意义的参考指标，为临床研究提供实验依据。

参考文献：

[1] Abas F，Alkan T，Goren B，et al.Neuroprotective effects of postconditioning on lipid peroxidation and apoptosis after focal cerebral ischemia/reperfusion injury in rats[J].Turk Neurosrg，2010，20（ 1） ： 1-8.

[2] Broughton BR，Reutens DC，Sobey CG.Apoptotic mechanisms after cerebral ischemia[J].Stroke，2009，40（5）：331-339.

[3] TORZEWSKI J，TORZEWSKI M，BOWYER DE，et a1.C-reactive protein requently colocatizes with the terminal complement complex in the intima of early atherosclerotic lesions of human coronary arteries[J].Arterioscler Thromb Vase Biol，1998，18：1389-1392.

编辑/成森