流式细胞术分析嗜碱性粒细胞活化试验在过敏性疾病诊断中的应用

[摘要] 流式细胞术是20世纪70年代发展起来的一种快速的细胞定量分析和分选的新技术，具有测量速度快、高灵敏度、高精确度、多参数分析、高纯度分选的特点。过敏性疾病为威胁人类生命健康的疾病之一，但其诊断通常依赖病史以及适当的确证试验，但这些确证实验尚缺乏有力确证依据。过敏反应发生时，嗜碱性粒细胞表面分子可发生相应变化，通过对其表面标志物的检测，可达到对过敏性疾病进行鉴别诊断的目的。本文就流式细胞术分析嗜碱性粒细胞活化试验的几种设门筛选嗜碱性粒细胞思路加以介绍，并对流式细胞术在过敏性疾病诊断中的应用价值做一综述，从而为流式细胞术在过敏性疾病诊断领域中广阔的应用前景提供一有力的理论支持。

[关键词] 流式细胞术；嗜碱性粒细胞活化试验；过敏性疾病

[中图分类号] R725.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）04（a）-0164-05

Application of flow cytometry analyzing basophil activation test in allergy diagnosis

ZHANG Haoyue HOU Yangdong GAO Cairong SONG Wei

Department of Forensic Medicine， Shanxi Medical University， Shanxi Province， Taiyuan 030001， China

[Abstract] Flow cytometry is a new technology for rapid quantitative analysis and sorting，which is developed during 1970s. It has many advantages such as rapid speed， sensitivity， accuracy， multi parameters， and high purity selection. Allergic disease is one of the diseases which is threatening human life and health. Allergic disease diagnosis usually depends on the history and the confirmatory test. However， those tests are lack of proven evidence. When allergic reaction occurs，basophils surface molecules will change correspondingly，so that detect these surface markers can be a feasible method of differential diagnosis of allergic disease. This paper introduces several gating strategies in a flow cytometry analyzing basophil activation test， and also reviews of the application value，in order to provide more powerful theoretical support for flow cytometry in the diagnosis of allergic disease.

[Key words] Flow cytometry； Basophil activation test； Allergic diseases

随着工业化社会的到来，过敏性疾病已逐渐成为影响甚至威胁人类生命健康的疾病之一。早在20世纪前，Portier和Richet就对过敏性疾病进行了描述，但速发型过敏反应的诊断目前仅依靠临床表现和病史，尚缺乏可靠的实验室诊断指标，并且但许多方法都是重现过敏反应过程，这使得检测过程并不是绝对安全且令人愉快的[1]。自1991年Knol等人阐述了关于嗜碱性粒细胞脱颗粒后的表面标记物CD63以来，建立在嗜碱性粒细胞活化功能的流式细胞术也随之发展起来[2]。近年来国内外研究进一步发现还可从其他细胞表面分子的方向如CD45、CD123、CD69、CD203c[3]以及CD13、CD164、CD107a、CCR3、CRTH2、P38MAPK等分子入手，对过敏性疾病加以诊断，可见流式细胞术作为一种新兴细胞分析技术，在过敏性疾病的诊断方面具有很大的潜力。本文就流式细胞术分析嗜碱性粒细胞活化试验的几种设门筛选嗜碱性粒细胞思路加以介绍，并对流式细胞术在过敏性疾病诊断中的应用价值做一综述，以期为今后实验工作提供有关理论依据和指导。

1 流式细胞术及嗜碱性粒细胞活化试验

1.1 流式细胞术

流式细胞术（flow cytometry，FCM）是利用流式细胞仪对处在快速、流动、直线运动状态下的荧光标记后的细胞或者颗粒进行定性、定量，并加以分选的细胞分析技术。其具有高速度、高灵敏度、高精度及高分辨率、分选纯度高、分析参数多的特点。

常用的胞术胞活化脱颗粒时的表面标志物后，基于嗜碱性粒细胞功能的的流式细胞术常用的荧光染料有异硫氰酸荧光素（FITC）、藻红蛋白（PE）、多甲藻叶绿素蛋白（PerCP）和一些能量传递的复合染料。这些染料可标记各抗体，并且不影响抗体自身的免疫反应特性。同时，这些染料经激发后各可发出不同波长的荧光。

荧光免疫标记一般分为间接荧光免疫标记和直接荧光免疫标记。间接荧光免疫标记：利用“一抗”标记细胞的特异抗原，再用荧光标记的“二抗”来检测细胞上的“一抗”。此标记法优点在于具有信号放大作用，但也存在很强的非特异干扰信号的缺点。直接荧光免疫标记：将各种不同的荧光素分子直接标记在各种不同特异性的单克隆抗体上。这样，若同时研究细胞不同抗原成分时，可选用不同的荧光素标记相应单克隆抗体。近年来FCM一般采用此标记法[4]。