流式细胞仪检测技术在食源性致病菌检测中的应用

DOI：10.3969/J.ISSN.1000-5137.2017.05.021

摘要： 流式细胞术是一种灵敏度高，耗时短，程序简便的定量细胞分析分选方法，广泛应用于微生物检测、环境监测、临床医学等领域，尤其在微生物检测中表现突出.流式细胞术正逐步应用于食源性致病菌的检测，研究并介绍了流式细胞术在几种食源性致病菌检测中的应用，该方法具有广阔的发展前景.

关键词：

流式细胞术； 微生物； 食源性致病菌； 快速检测

中图分类号： Q 93338文献标志码： A文章编号： 10005137（2017）05075705

Application of Flow Cytometry technique in detection of

foodborne pathogens

Mei Shiliang1， Jiang Kai1， Zhang Nana1， Zheng Yizhou1， Wang Jie1， Zhou Yuxi2， Zhao Yu1*

（1.Development Center of Plant Germplasm Resources，College of Life and Environmental Sciences，

Shanghai Normal University，Shanghai 200234，China；

2.Beckman Coulter Trading （China） Limited，Shanghai 200122，China）

Abstract：

Flow Cytometry technique is a quantitative cell analysis method with characteristics such as high sensitivity，timesaving，simple procedure，which is widely applied in microbial detection，environmental monitoring，clinical medicine and other fields，especially in microbial detection.Flow Cytometry is being gradually applied in the detection of foodborne pathogens.This study introduced the application situation of Flow Cytometry technique on several foodborne pathogenic bacteria.It shows the technology has many advantages and a vast development future.

Key words：

Flow Cytometry； microorganism； foodborne pathogens； quick analysis

收稿日期： 20170831

基金項目： 上海市2017年度“科技创新行动计划”（1714220300）；上海植物种质资源工程技术研究中心项目（17DZ2252700）

作者简介： 梅仕良（1994-），男，硕士研究生，主要从事食品微生物及应用方面的研究.Email：18297309020@163.com

导师简介： 赵渝（1973-），男，博士，副教授，主要从事食品质量安全控制方面的研究.Email：zhaoyu@shnu.edu.cn

*通信作者

食品安全问题主要源于食物细菌性中毒，其中大多为食源性致病菌，已成为全球公共安全问题，必须得到有效解决[1].检测食源性致病菌的传统方法包括：显色培养基培养法、平板计数法；现代快速检测方法包括：免疫层析试纸条技术、基于免疫学的ELISA技术、基因芯片技术、三磷酸腺苷（ATP）生物发光技术、聚合酶链式反应（PCR）技术等[2].虽然以上检测技术准确性高，但耗时长，不能满足现场快速检测的需求[3].

流式细胞术（FCM）是一种能检测并分析细胞或微生物颗粒理化特征的定量方法[4]，可同时分析多个参数，既快速高效，又可大量收集并较为全面地分析数据，灵活性很强，主要应用于临床医学的细胞分析[5].流式细胞仪的工作原理是待测液颗粒依次通过检测区，被荧光染色标记的细胞在激光照射下激发光信号，光信号转换成电信号被计算机识别，最后由软件分析[6].目前，这一技术正向微生物检测，食品安全监测领域发展[7].

随着荧光染料、免疫磁珠等的发展，FCM在食源性致病菌，如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、单核增生李斯特菌等的特异性检测中已经取得了丰富的研究成果[8].本文作者综述了流式细胞术在食源性致病菌检测中的研究近况.

1金黄色葡萄球菌检测

金黄色葡萄球菌是很典型的一种食源性致病菌[9]，由于国家卫生部严格限制其在食品中的含量，需要快速有效、准确度高的方法[10].检测金黄色葡萄球菌的传统方法有：平板计数法、显色培养基培养法，耗时都较长，前者需要5～7 d；现代快速检测方法包括免疫磁珠富集法、ELISA技术、PCR技术、核酸探针技术等.周莉等[11]运用PCR法快速检测食品中的金黄色葡萄球菌，检测时间为24 h，检出限为10 CFU/g.Kim等[12]利用免疫磁珠富集法对牛奶中的金黄色葡萄球菌进行检测，检测灵敏度为2.8×102 CFU/mL，检测限达到5.0 CFU/mL.董晓林等[13]利用流式细胞术，建立基于适配体识别的金黄色葡萄球菌的检测方法，对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌（O157：H7）共同进行实验，利用羟基荧光素（FAM）荧光素标记的特异性适配体FAMSA17对金黄色葡萄球菌进行特异性检测，检测时长为40 min，该方法检测限较高，与适配体亲和力有关.