CD40CD40L系统对主动脉粥样硬化兔血浆黏附分子水平的影响

【摘要】目的探讨CD40CD40配体系统(CD40CD40L)对不同因素致动脉粥样硬化形成的血浆黏附分子影响。方法40只实验兔随机分为5组，每组8只。A组(正常对照组)：普通颗粒饲料喂饲；B组(高脂模型组)：高脂饲料喂饲；C组(高脂模型CD40阻断组)：高脂饲料喂饲同时给予抗CD40配体抗体05 ml(250 μg)，腹腔注射，每周两次；D组(免疫刺激组)：应用肺炎衣原体感染制备动脉硬化模型；E组(免疫刺激CD40阻断组)：制备模型的同时给予抗CD40配体抗体05 ml(250 μg)，腹腔注射，每周两次； 实验共16周。实验结束后，检查如下指标： ① ELISA法检测sCD40L、sVCAM1、sICAM1。斑块/内膜面积比。16周末获取标本检测分析。结果B、C、D、E组与A组比较sCD40L sVCAM1、sICAM1水平升高(P<001)。C、E组与B、D组比较sCD40L、 sVCAM1、sICAM1水平降低(P<001)。结论通过高脂饮食、免疫刺激可引起实验兔sCD40L、 sVCAM1、sICAM1水平升高，阻断CD40CD40L，可降低实验兔sCD40L、 sVCAM1、sICAM1水平，从而抑制炎症反应、延缓动脉粥样硬化进展。

【关键词】动脉粥样硬化；CD40CD40配体；可溶性细胞间黏附分子；可溶性血管细胞黏附分子

动脉粥样硬化(artherosclerosis;AS)是心脑血管疾病发病的重要病理基础，是多因素作用的慢性炎症性疾病，CD40CD40配体系统(CD40CD40L)是机体发生炎症反应过程中重要的信号通路［1］，推测抑制CD40CD40L系统可以抑制或减缓AS的发生、发展。本研究以不同机制制备AS模型，应用抗CD40配体抗体阻断CD40CD40L系统，观察高脂饮食、免疫刺激对实验兔血脂、可溶性CD40配体(sCD40L)、可溶性细胞间黏附分子(sICAM1)、可溶性血管细胞黏附分子(sVCAM1)的影以及阻断CD40CD40L后对上述指标的影响，探讨 CD40CD40L在动脉硬化形成中的作用，为临床治疗AS提供新的途径。

1材料与方法

11实验材料健康雄性日本大耳白兔40只，体重(20±015)kg，分笼饲养，由辽宁医学院实验动物中心提供。药品：胆固醇(北京邦定生物制药有限公司)；sCD40L、sVCAM1、sICAM1试剂盒(七海森雄科技实业有限公司产品)。仪器：全自动生化分析仪；OLYMPUS CH20型光学显微镜；CIAS1000图像分析仪等。

12实验方法

121实验动物模型制备与分组健康日本雄性大耳白兔40只，体重(200±015)kg，随机分为5组，每组8只。①正常对照组：普通颗粒饲料喂饲；②高脂模型组：高脂饲料喂饲。③高脂模型CD40阻断组：高脂饲料喂饲同时给予抗CD40L配体抗体05 ml(250 μg)，腹腔注射，每周两次。④免疫刺激组：应用肺炎衣原体感染制备动脉硬化模型，经鼻腔感染混有肺炎衣原体的SPG缓冲液05 ml，3周后再次感染。⑤免疫刺激CD40阻断组：制备模型的同时给予抗CD40L配体抗体05 ml(250 μg)，腹腔注射，每周两次；实验共16周。于第16周末检测指标。

122观察指标及测定方法①sCD40L、sVCAM1、sICAM1:应用ELSIA法检测。②病理形态学观察：动物麻醉后,剪开胸腔，以4e磷酸盐缓冲液(001 mol/L)灌洗主动脉至灌流液清亮为止，游离主动脉,取胸主动脉,分为3段，分别切取4Lm厚的标本制成病理切片,HE染色,采用图像分析系统测量斑块面积和内膜面积，计算斑块/内膜面积比。

13统计学分析用SPSS 130统计软件分析，所有计量资料用均数±标准差(x±s)表示，两组间比较采用q检验，P<005差异有统计学意义，P<001差异有显著统计学意义。

2实验结果

21血清CD40L、sVCAM1、sICAM1 ：B、C、D、E组与A组比较sCD40L水平升高(P<001)。C、E组与B、D组比较sCD40L浓度明显降低(P<001)。见表1。

22斑块/内膜面积比： B组、C组、D组、E组实验兔主动脉均可见动脉粥样硬化斑块形成，C组与B组比较斑块/内膜面积比降低，E组与D组比较斑块/内膜面积比降低(P<001)。见表2。

表1各组兔血清sCD40L、sVCAM1、sICAM1浓度比较(x±s，n=8)

组别sCD40L(ug/l)sVCAM1(ug/l)sICAM1(ug/l)A组101±018158±024458±098B组323±053*523±108*1323±208*C组256±028*#356±096*#856±116*#D组294±030*511±109*1111±189*E组209±021*△320±085*△720±105*△注：A组比较，*P<001；与B组比较，#P<001；与D组比较，△P<001

科研项目：辽宁省教育厅项目(项目编号：2010082)

作者单位：121000锦州，辽宁医学院附属第三医院心血管内科

表2各组兔斑块/内膜面积比(x±s，n=8)

B组C组D组E组斑块/内膜面积比(%)6123±3392551±221#5453±3662353±415△注：与B组比较，#P<001；与D组比较，△P<001

3讨论

近年研究发现CD40CD40L在AS发病中起重要作用，正常动脉内皮细胞仅表达少量CD40，在AS斑块中的内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞高表达CD40和CD40L，其分布与某些和AS的发生发展密切相关的功能性分子的分布具有一致性［2］。本实验结果显示，不同因素致AS形成均可导致sCD40L水平升高，并且通过抗CD40抗体阻断CD40CD40配体系统后，C组、E组AS斑块面积较对照组B组、D组明显减少。

多项研究也证实，不论是内源性或外源性的sCD40L均诱导AS斑块内相关细胞表达和产生一系列与斑块发生、发展、破裂相关的活性物质，这些分子包括黏附分子、基质金属蛋白酶、细胞因子和组织因子等［3］。ICAM1和VCAM1是介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间黏附作用的膜表面糖蛋白，在炎症与免疫应答、凝血与血栓形成等多种生理、病理过程中发挥重要作用，参与调控细胞的功能［4］。本实验结果显示各实验组血浆sICAM1、sVCAM1水平均升高，通过抗CD40抗体阻断后，C组、E组血浆sICAM1、sVCAM1水平与模型组B组、D组比较明显降低。

本实验研究认为AS是多种因素共同作用的结果，阻断CD40CD40L系统后可通过调节CD40CD40L表达，调脂、减轻炎症反应等，延缓AS的发生发展，调节CD40CD40L表达的新路径，将为治疗AS提供新的靶点，为临床防治动脉硬化提供新的思路。

参考文献

［1］AndreP, Nannizzi2AlaimoL, PrasadSK, PhillipsDR PlateletderivedCD40L: TheswitchHittingplayer of cardio vascular disease Circulation,2002,106(8):896899.

［2］Ansell BJ, Fonarow GC, Navab M, et al Modifying the antiinflammatory effects of highdensity lipoprotein Curr Atheroscler Rep,2007,9(1):5763.

［3］Wierzbicki AS LipidAltering Therapies and the Progression of Atherosclerotic Disease Cardiovasc Intervent Radiol,2007,30(2):155160.

［4］Fisker Hag AM, Pedersen SF, Kjaer A Gene expression of LOX1, VCAM1, and ICAM1 in preatherosclerotic miceBiochem Biophys Res Commun, 2008,377(2):68993.