肝细胞癌中Pyk2、Twist及E—cadherin的表达及临床意义
%wmʺ,wv{dDqaz"ib^+-/j zYnj" jkXzܫȧzHjǶ?)6~azȨHjDž M[jȜbZ(,tzzbjY܇)ڞȭ11qazIՊȨ<" i^)uvNMv7rnt筸~~\nrmNu]dDqazub*'?)6OGvsdDqazIh*]IՊȨ6ky"http://www.wufanghuizhong.com/p/duizhao/" target="_blank" class="keylink">对照，阳性对照为试剂公司提供的强阳性标本切片，阴性对照采用磷酸盐缓冲溶液代替一抗。
1.3 结果判定
Pyk2蛋白阳性：细胞质内出现棕黄色或棕褐色颗粒；Twist蛋白阳性：细胞质内出现棕黄色颗粒；E-cadherin蛋白阳性：细胞膜和（或）细胞质内出现棕黄色颗粒。在不知任何背景资料的情形下，由两位病理专家采用双盲法进行阅片。首先依据染色强度打分，无染色记为0分，淡黄色记为1分，棕黄色记为2分，棕褐色记为3分，染色需与背景着色相比较。再将阳性细胞所占的百分比进行打分，无阳性细胞记为0分，阳性细胞所占百分比为1%～25%记为1分，阳性细胞所占百分比为>25%～50%记为2分，阳性细胞所占百分比为>50%～75%记为3分，阳性细胞所占百分比为 >75%～100%记为4分。最后根据染色强度与阳性细胞百分比乘积进行评分，≥4分记为阳性表达，<4分记为阴性表达。
1.4统计学分析
采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行分析，计数资料采用χ2检验，等级相关检验采用Spearman等级相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1肝癌组织及癌旁组织中Pyk2蛋白的表达
Pyk2阳性染色主要位于细胞质，细胞核未见明显染色，染色为棕黄色或棕褐色，呈小片状或弥漫性分布（图1）。Pyk2在肝癌组织中的阳性表达率为71.3%，在癌旁肝组织中的阳性表达率为12.0%，两种肝组织中的阳性表达率比较，差异有统计学意义（P<0.05）（表1）。
2.2肝癌组织及癌旁组织中Twist蛋白的表达
Twist蛋白的阳性着色位于细胞质，为棕黄色颗粒（图2）。Twist在肝癌组织中的阳性表达率为66.3%，而在癌旁肝组织的阳性表达率为6.0%，两种肝组织中的阳性表达率比较，差异有统计学意义（P<0.01）（表1）。
2.3肝癌组织及癌旁组织中E-cadherin蛋白的表达
E-cadherin蛋白的阳性着色主要位于细胞膜或细胞质，呈棕黄色或棕褐色颗粒（图3）。E-cadherin在肝癌组织中的阳性表达率为27.5%，而在癌旁肝组织的阳性表达率为90.0%，两种肝組织中的阳性表达率比较，差异有统计学意义（P<0.01）（表1）。
2.4 Pyk2、Twist和E-cadherin蛋白表达与肝癌临床病理特征的关系
肝癌中Pyk2阳性表达与患者年龄、性别、AFP、肿瘤大小及包膜完整性无关（均P>0.05），与病理分级、肿瘤分化、血管侵犯及临床TNM分期有关（均P<0.05）。肝癌组织中Twist阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、AFP及包膜完整性无关（均P>0.05），与病理分级、肿瘤分化、血管侵犯及TNM分期有关（均P<0.05）。肝癌组织中E-cadherin阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、AFP及包膜完整性无关（均P>0.05），与病理分级、肿瘤分化程度、血管侵犯及TNM分期有关（均P<0.05）。Pyk2、Twist共同高表达于分化程度低、血管侵犯、病理分级较差及分期较晚的肝癌组织中（表2）。
2.4 Pyk2、Twist和E-cadherin在肝癌组织中表达的关系
Spearman等级相关分析显示，肝癌组织中Pyk2与Twist蛋白表达成正相关（r=0.425，P=0.032），Pyk2与E-cadherin的表达成负相关（r=-0.472，P=0.026）；Twist与E-cadherin的表达也成负相关（r=-0.308，P=0.037）。
3讨论
Pyk2是一种富含脯氨酸的非受体酪氨酸蛋白激酶，定位于人第8号染色体（8 p21.1），基因全长4.048 kbp。Pyk2依赖于钙离子浓度的变化而被激活，调控细胞增殖、分化及侵袭[8-10]。Pyk2能诱导乳腺癌细胞发生上皮间质转化，促进肿瘤细胞侵袭和迁移[11]。本研究结果显示，Pyk2在肝癌组织中高表达，在肝癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁肝组织（P<0.05），提示Pyk2基因与肝癌的发生、发展有关。进一步的研究还显示，Pyk2阳性表达还与病理分级、肿瘤分化、血管侵袭及TNM分期密切相关，提示Pyk2能在肝癌细胞分化、侵袭转移过程中发挥重要作用。
Twist不仅在胚胎形态发生中起关键调控作用，还参与调控肿瘤细胞增殖分化、侵袭转移等过程[12]。胰腺癌中Twist高表达，并且与肿瘤分期、侵袭转移密切相关[13]。结直肠癌中也存在Twist高表达，并且沉默Twist基因后结直肠癌细胞增殖及迁移力显著下降[14]。本研究结果显示，Twist在肝癌组织中的表达率明显高于癌旁肝组织（P<0.05），并且Twist阳性表达还与病理分级、肿瘤分化、血管侵袭及临床TNM分期有关（P<0.05），提示Twist在肝癌侵袭转移过程中发挥重要作用。Twist在低分化、中晚期的肝癌中的表达明显增强，进一步支持了Twist参与肝癌恶性进展，这与车娜等[15]的研究报道一致。相关性分析显示，Pyk2与Twist在肝癌中的表达成正相关（P<0.05），提示Pyk2与Twist共同参与了肝癌恶性侵袭，推测Pyk2可能通过上调Twist促进了肝癌侵袭、转移。
上皮间质转化是肿瘤细胞获得侵袭和迁移能力的重要机制，当E-cadherin表达下调时，细胞间的黏附力下降，最终导致肿瘤细胞侵袭及转移[16]。E-cadherin在甲状腺乳头状癌组织中低表达，其表达与临床分期及淋巴结转移密切相关[17]。本研究结果显示，E-cadherin在肝癌组织中的阳性表达率显著低于癌旁肝组织，E-cadherin阳性表达与病理分级、肿瘤分化、血管侵袭及TNM分期有关（P<0.05），提示E-cadherin与肝癌侵袭转移密切相关。本研究结果还显示，Pyk2、Twist及E-cadherin在肝癌组织中异常表达，并且三者密切相关，提示Pyk2、Twist及E-cadherin在肝癌侵袭转移过程中发挥了协同作用。
综上所述，肝癌组织中存在Pyk2、Twist及E-cadherin异常表达，其共同参与了肝细胞的癌变及恶性侵袭转移过程。Pyk2可能为肝癌的诊断和治疗提供一个新的分子靶点。
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（收稿日期：2016-12-26 本文编辑：祁海文）
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