介绍几种微生物检验的有关技术

【中图分类号】B711      【文献标识码】A      【文章编号】1672-3783（2019）08-0014-02

随科学技术的持续进步和快速发展，使微生物检验技术得到飞快的发展，已经从传统单一培养方法发展成许多检验技术并存的情况，而且检验速度越来越快，精度越来越高。此次，介绍比较典型的一些微生物检验技术。

1 常规方法

显色培养基技术：借助微生物所对应的特异酶，培养基中加同其对应显色酶，使微生物的生长代谢中产生酶，而对底物进行水解，进而对培养物着色，最终实现准确对微生物进行鉴定。最开始是在大肠杆菌检验中应用，后期其应用范围得到持续的扩展。目前，显色培养基技术在金黄色葡萄球菌、志贺氏菌以及单增李斯特氏菌等检测中使用，还可根据在不同显色培养基中不同菌群的不同显色效果，能快速检测，有效判定菌群的种类。快速纸片法在大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等微生物检测中存在准确、快速的优点。

纳米装置：根据纳米粒子特性，在标记物检测装置中使用纳米粒子，当物体尺度比纳米尺度小时，就有同宏观尺度物质不同性能变现出现，所以被称作是纳米效应。这种效应可当做微生物分析的标记物质，明显改善标记物的性能，明显提高检测灵敏度。

电阻抗法：其原理是在琼脂培养基中细菌的生长繁殖中，会致使培养基中的大分子电惰性物质（脂肪、蛋白质、碳水化合物）逐渐代谢成活性的小分子物质（带电荷的尿酸以及胺类等），进而提高琼脂培养基导电性能，对培养基电阻抗进行改变，经检测电阻抗就可对细菌在培养基中的生长繁殖情况进行判定，有效判定细菌的生长繁殖特性，从而检测出细菌。同未培养细菌培养基进行对照实验，绘制阻抗曲线图，比对和分析标准细菌阻抗图谱，可确定细菌类型以及数量。该技术在单增李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、酵母菌、霉菌等病原微生物的检测中使用。

免疫磁珠分离技术：对于同阳性分离法磁珠向结合的细胞来说，就是所要分离得到的细胞，不需要得到的细胞同阴性分离法磁珠进行结合。在磁场游离的细胞是所需细胞时，经免疫磁珠分离法，把特异性抗体同磁珠颗粒表面关联，特异性结合样品中微生物，在外部磁场作用下，装有病毒微生物磁珠会向两端靠拢，从而分离出微生物。该技术在含大量的细菌溶液中，选择性分离微生物，检出效率比较高。但是该技术会给细胞造成较大的机械压力，对细胞的生物学活性产生影响，进而影响到细菌分离后培养，同时成本比较较高，且操作繁琐，使其应用受限。通常情况下，阴性磁珠分离法所使用的磁珠比阳性分离法要多，所以大都是选择阳性磁珠分离法对微生物进行检验。

2 分子生物学技术

这种技术术语新型的一种分子技术，主要是在分子的水平上对微生物线性结构进行分子来认知微生物的类型，具有灵敏度高、特异性强的优势。

可视化基因芯片技术：因基因芯片的灵敏度高以及高通量等特点，在微生物检测中其已经成为研究的热点。在催化作用下，酶会产生沉淀，在基因芯片表面沉积，而明显增加基因芯片厚度，而实质性的改变基因芯片上的反射光的波长，根据基因芯片颜色变化情况可明确实验结果。该技术的检测效率高且操作方便快捷，在较短时间内就能得到检测结果，但是操作要求比较多，且成本较高，使其应用受限。

荧光标记噬菌体技术：该技术是利用噬菌体会对宿主菌产生特异性侵染的原理，噬菌体核酸通过合适染色剂进行染色标记，之后对相应宿主菌进行侵染，在宿主菌的表面吸附着噬菌体，之后标记的核酸注入到宿主细胞，噬菌体核酸注入越多，随荧光素增多使细胞内荧光增强，通过荧光显微镜就可对宿主菌存在进行判定，最终实现病原菌检测。多数噬菌体同宿主一一对应，具有很高的特异性，但是宿主范围比较窄，而且尚未明確噬菌体同宿主之间作用的裂解机理，限制了该技术的应用。但该技术的检测周期短，准确性好，可区分活细菌和死细菌，并不需纯化细菌，在预增菌后就能检测，检测过程大都在八小时内就会结束，且可同步检测多种细菌。

荧光定量聚合酶链式反应：该技术是通过荧光标记或者荧光染料的特异性探针标记聚合酶链式反应产物，分析图示结果可计算得到待检样品初始浓度。荧光定量聚合酶链式反应技术是根据已知的细菌遗传信息，使用特定引物探针对序列进行扩增，根据是否出现特定长度的扩增产物而判断目标细菌是否存在。在病原菌毒素、微生物检测中，该技术存在特异性强、灵敏、快速等优点，还可实现多项目、多通道检测。

基因探针技术：只有通过生物技术才能准确的区分致病菌和有益菌和致病菌。基因探针技术可准确检测出菌类，该技术是通过一段已知的基因核酸序列当做探针，同变性后单链基因组脱氧核糖核酸接触时，如果碱基完全配对，就会互补成双链，说明被测基因组的脱氧核糖核酸中存在已知基因序列。基因探针技术存在灵活性高、特殊性强、节省机间、操纵便捷等有点，但成本比较高。

微滴数字聚合酶链式反应技术：在微滴数字聚合酶链式反应的扩增前，是对但反应体系做微滴化处理，经油包水技术进行分割，得到数万个微滴（纳升级），每个微滴可不含也可含待检核酸靶分子，且每个微滴都属于独立的一个聚合酶链式反应体系。按阳性微滴个数以及比例，经泊松分布原理可得到靶分子起始的拷贝数，最终实现最初反应体系中的核酸靶分子数绝对定量。同传统聚合酶链式反应技术以及荧光定量聚合酶链式反应技术比较来说，微滴数字聚合酶链式反应技术的更具有灵敏度、特异度、准确性以及精确度，可做到绝对定量。这种技术已经应用于地沟油检测、转基因检测、动物疫病检测、微生物检测、疾病检测、质检领域等方面。

叠氮化乙锭-聚合酶链式反应：叠氮溴化乙锭结合荧光定量聚合酶链式反应技术，可快速、有效检查维生素，能快速的渗透细胞壁以及穿透细细胞膜，而进入到细胞内。死细胞细胞膜已被破坏，叠氮溴化乙锭可很容易的渗入细胞，而插入DNA双螺旋。但是活菌存在完整的细胞膜，叠氮溴化乙锭无法渗透，所依选一定浓度叠氮溴化乙锭和菌液，高强度钨灯进行照射处理，可插入DNA的双螺旋上，并发生不可逆的共价交叉偶合，对聚合酶链式反应扩增中引物同死菌DNA结合进行抑制，而区分活菌和死菌。该技术可准确的、快速的鉴定和区分死菌以及活菌，同普通的聚合酶链式反应技术向比较来说，可明显降低假阳性率。该技术存在检测结果准确、灵敏度高以及检测周期短等特点。