病理诊断中胸腹水细胞块结合免疫组化

【摘 要】 目的：分析胸腹水细胞块结合免疫组化在病理诊断中的应用效果。方法：从本院2017年8月至2018年8月经手术活检确诊为恶性胸腹水积液患者中选46例。所有患者胸腹水液基细胞制作细胞块，并切片，随后分别进行免疫组化与HE常规染色。对比两种不同染色方法的病理诊断结果。结果：统计分析，相对比常规HE染色方法，实施细胞块结合免疫组化的病理诊断阳性率明显要高，且检验数据P<0.05，差异符合统计学意义。结论：临床诊断肿瘤细胞阳性中，将细胞块与免疫组化结合应用，可明显提高肿瘤阳性诊断准确率，应用价值较高。

【关键词】 免疫组化;病理诊断;细胞块;胸腹水

文章编号：WHR2019052635

胸腹腔积液其实就是胸腹水，是肿瘤性疾病常见的症状。大部分晚期恶性肿瘤患者会出现胸腹水。分析便可发现，形成胸腹水的原因并不具有单一性[1-2]，唯有准确判断胸腹水的性质，才有利于临床疾病确诊、治疗，并且还有助于改善患者预后。临床中比较常用的诊断方法是胸腹水脱落细胞学检查。但相比较组织学病理诊断准确率，单纯的细胞形态学准确率要低，对临床确诊疾病构成不利影响。本文作者分析胸腹水细胞块结合免疫组化在病理诊断中的应用效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料

從本院2017年8月至2018年8月经手术活检确诊为恶性胸腹水积液患者中选46例。男25例，女21例，患者的年龄为28～66岁，平均年龄为（46.9±5.3）岁;胸水20例，腹水26例;容量50～500mL，平均为（300.3±82.6）mL，液体颜色为血色或淡黄色;其中肺腺癌15例，恶性间皮瘤1例，肺鳞癌3例，小细胞癌12例，鳞状细胞癌15例。

1.2 方法

采集所有患者胸腹水液基细胞制作细胞块，并切片，随后分别进行免疫组化与HE常规染色。制备细胞学涂片：在静止状态下抽取患者胸腹水样品，0.5h后使用吸管从距离瓶底的液体中吸取8mL，并放在离心管内保持3500r/min的速度离心操作15min。留取下段液体，并将底部的沉淀物涂在切片上固定。染色使用瑞士-姬姆萨，指导涂片显示为紫红色。细胞块切片：如抽取的积液样本超过200mL，需在室温条件下放置6h，留取下段清液100mL，依照1∶9的比例将甲醛溶液和积液量进行配置，将浓度为40%的甲醛溶液混于积液内，摇匀后放置在室温条件下过夜。次日清晨取上清液，将底部沉淀物充分摇匀后放置在离心管内，保持3500r/min的速度离心15min，离心后的沉淀物需进行脱水、浸蜡、包埋后予以HE染色。免疫组化染色：依据细胞涂片的形态学改变选择抗体，应用En Vision操作进行免疫组化，操作时需严格依照说明书展开，使用的试剂为SP、TTF-1、CK5/6、CK7、CK20、CA125、CEA、CR、EMA、EA、DES、MC等。切片的厚度控制在4μm，通过防脱玻片对切片进行裱片，修复环境应在高温、高压下。任选抗体放在4℃的冰箱内过夜，DAB显色后，复染需应用苏木素。

1.3 判断指标

阳性率诊断：CR与TTF-1等免疫组化标记物阳性表达在细胞核中，CK5/6、EMA和CEA阳性表达定位在细胞膜，细胞浆的阳性表达主要来源于CK20、CK7、CA125、DES，并能够观察分布的棕黄色颗粒，在目标细胞达到10%时可确定为阳性。

1.4 统计学分析

本次研究活动使用统计学软件SPSS 21处理各类数据，两组患者的计量资料应用（±s）来表示，并进行t检验;计数资料则采用百分比（%）表明，组间差异采用χ2检验，如数据检验P<0.05，表明两组数据差异具有统计学意义。

2 结果

统计分析，相对比常规HE染色方法，实施细胞块结合免疫组化的病理诊断阳性率明显要高，其中常规染色方法的阳性准确率为78.3%，而细胞块结合免疫组化阳性准确率为95.7%，且检验数据P<0.05，差异符合统计学意义。

3 讨论

一般情况下，患者体内的积液积聚在胸膜腔中即表现为胸腹水。受到多种不同因素的影响，患者胸膜腔内的液体吸收减少或增多就会有胸腹水。胸腹水症状多出现在病情比较严重的恶性肿瘤患者中。临床诊断与治疗期间，胸腹水的确诊有着非常重要的辅助性价值。利用影像学检查，可确定积液的多少和具体位置。但细胞学检测始终是病理诊断良恶性肿瘤的重要手段。

在过去，临床诊断主要通过细胞离心沉降液涂片，但是该种检查方法的准确度有待考证。细胞块检查中会发现大量的保存切片，并结合免疫组化和胸腹水细胞块，从而弥补细胞涂片中存在的缺点，有助于临床诊断。操作中制取胸腹水胸包沉渣石蜡切片比较简单。细胞沉渣石蜡包埋可取得活检组织样本的连续切片，有助于细胞集中，避免检查中出现误差。石蜡纸片可避免细胞涂片厚度不达标而出现的重叠、成团以及结构模糊等多种缺陷，且掉片率明显较低，对提高染色定位准确与可靠性具有重要的作用[3-4]。涂片相对清晰的前提下，对提高判断准确率具有明显的效果，胸腹水的沉渣蜡片在实际中能够连续切片，且还可反复操作，依据临床的需要连续操作，能够进行多次操作，如免疫组化染色、原位核酸分子杂交染色和细胞化学染色等多项操作。免疫组化依据特异性情况可监测细胞中不明确的抗原，依据相关的有色反应，能够确定细胞定位、分布与活性等多种情况，制作胸腹水细胞块实现免疫组化染色可取得较好的效果，促进细胞集中，有助于更好的观察细胞，且处理过程与细胞块相同，有效避免阳性脱落与抗原受损的情况，从而可获得与组织块相同的结果，有助于提高细胞学检测阳性率，同时还可确定组织的来源[5]。将细胞块与免疫组化相互结合，对提高病理诊断准确率具有显著的效果，同时还有助于细胞学阳性检出率，降低误诊与漏诊率。与此同时通过细胞块和免疫组化可鉴别诊断恶性肿瘤细胞，并确定组织来源，为诊断恶性肿瘤提供重要根据。如恶性间皮细胞、腺癌细胞核增生的间皮细胞可通过TTF-1与CEA等抗体鉴别。因此，免疫组化有助于临床医师鉴别诊断，还能够确定肿瘤细胞来源和类型，结合细胞块诊断准确率明显提高。

综上所述，临床诊断肿瘤细胞阳性中，将细胞块与免疫组化结合应用，可明显提高肿瘤阳性诊断准确率，应用价值较高。

参考文献

[1] 冯晨，徐康宁.病理诊断中免疫组化技术的应用探讨[J].世界最新医学信息文摘，2017，17（59）：69-75.

[2] 刘毓玲，张锋，周林，等.免疫组化室内质量控制与评价[J].诊断病理学杂志，2017，24（01）：68.

[3] 成克伦.改良手工免疫组化在病理诊断中的应用[J].中国校医，2017，31（02）：158-159.

[4] 李丽莉，白东亭.免疫组化诊断试剂性能分析研究中质量控制关键问题探讨[J].中国生物制品学杂志，2017，30（09）：993-998.

[5] 刘红伟.免疫组化组织芯片制作及质量控制[J].现代医学与健康研究电子杂志，2017，01（02）：10-11.