血性体液细胞学涂片及包埋方法的改进

摘要：目的 探讨血性体液细胞学涂片及包埋方法。方法 选取新鲜血性体液细胞学标本编号后随机分为对照组和实验组，对照组将编号的新鲜血性体液细胞学标本静置片刻后，取底部沉淀的体液90 mL，分别放入2支45 mL离心管，离心机以3000 r/min离心10 min，不加任何处理，直接涂片备用。剩余沉渣用95%酒精固定做包埋切片备用。实验组在对照组的基础上离心后，一次性去上清液后，加入10%冰醋酸10 mL在振荡仪上振荡10 min，再次以3000 r/min离心10 min，去冰醋酸，吸管吸取表层部分沉渣涂片，用酒精灯烤干涂片冷却后放入90%酒精固定备用，剩余沉渣用95%酒精固定做包埋切片备用。观察两组涂片处理效果。结果 对照组染色效果不佳，出现严重的非特异性背景染色，致阳性定位不清；实验组染色清晰，非特异性背景染色少，对肿瘤细胞、间皮细胞等阳性定位准确。结论 本方法避免了传统涂片的不足，阳性检出率高，试剂配制简单，成本低，具有较高的应用价值，值得推广。

关键词：血性体液细胞学涂片；冰醋酸；包埋切片；阳性定位；非特异性背景

细胞学检查诊断胸、腹水等恶性肿瘤已成为病理科一项常规检查项目，其具有取材方便、易行、患者痛苦少等优点。日常工作中，胸腹水等细胞诊断难度很大，尤其是腺癌、间皮瘤和间皮增生的鉴别诊断。提高细胞制片质量，做出稳定可靠的细胞片，是保证诊断准确性的前提条件。但多数体液细胞学标本中含有大量红细胞，难以制作优良的细胞涂片，常影响结果观察，采取何种方法除去红细胞？获得良好的细胞学涂片及包埋制片，以提高阳性检出率。为此，我科经过长期反复摸索，对传统的血性体液细胞学涂片及包埋方法进行了改进，将血性体液细胞离心后，加入10%冰醋酸振荡处理，除去红细胞，再行沉渣涂片及包埋制片，收到了满意的效果，现将方法介绍如下。

1资料与方法

1.1一般资料 2013年1月～2014年5月安徽省中医院病理科血性胸腹水、尿等体液细胞学标本。

1.2方法 实验组将编号的新鲜血性体液细胞学标本静置片刻后，标本中有形细胞受重力影响大部沉于底部，故取底部沉淀的体液90 mL，分别放入2支45 mL离心管，离心机以3000 r/min离心10 min，一次性去上清液后，加入10%冰醋酸10 mL在振荡仪上振荡10 min，再次以3000 r/min离心10 min，去冰醋酸，吸管吸取表层部分沉渣涂片，用酒精灯烤干涂片冷却后放入90%酒精固定备用，剩余沉渣用95%酒精固定做包埋切片备用。对照组将编号的新鲜血性体液细胞学标本静置片刻后，取底部沉淀的体液90 mL，分别放入2支45 mL离心管，离心机以3000 r/min离心10 min，不加任何处理，直接涂片备用。剩余沉渣用95%酒精固定做包埋切片备用。

2结果

对照组未处理的涂片，背景一片红染，模糊不清，细胞结构显示不清晰，见图1。由于大量红细胞存在，易造成涂片厚薄不均，染色效果不佳，甚至涂片在染色水洗过程中脱片，大量红细胞遮挡或覆盖肿瘤细胞、间皮细胞、炎细胞等有诊断价值细胞，造成漏诊或误诊；沉渣包埋切片由于红细胞过多，加做的免疫酶标及特殊染色的，出现严重的非特异性背景染色，致阳性定位不清，见图2。

实验组经10%冰醋酸处理沉渣的涂片中红细胞几乎消失或淡染，背景干净，肿瘤细胞、间皮细胞、炎细胞等核膜、染色质、核仁结构清晰，染色分明，细胞无变形，亦无脱片掉片现象，见图3；沉渣包埋切片加做免疫酶标及特殊染色，非特异性背景染色少，对肿瘤细胞、间皮细胞等阳性定位准确。阳性率明显提高，见图4。

3讨论

胸腹水是临床上多种肿瘤的常见伴随症状，而且是多种肿瘤的首发症状，在肿瘤的诊断及治疗中具有重要意义[1]。长期以来，对提高细胞学阳性率和准确性的研究，一直是细胞病理工作者研究的重点，国内外主要集中在两个方面：①对细胞学制片方法的改进的研究；②如何鉴别良恶性细胞的主观判断。病理工作者一直都在寻找和研究更加客观的新技术方法和诊断指标。而"许多诊断困难的涂片，实际上是涂片制作质量不佳造成的"，质量优良的涂片细胞必须清楚，核膜，染色质、核仁等结构必须清晰[2]。涂片中有效细胞量的多少也是涂片质量的重要方面，细胞太少，容易漏诊，细胞量太多，涂片太厚，容易造成染色水洗时掉片外，还影响读片效果，本方法可以明显提高涂片质量。通过吸取底层少量细胞涂片，不会涂片太厚，避免掉片。

血性体液标本，离心后沉渣经过10%冰醋酸处理，低渗冰醋酸可使部分红细胞迅速破裂溶解[3]。冰醋酸能固定核蛋白，使细胞核形态清晰，便于辨 认[4]。涂片中红细胞几乎消失，肿瘤细胞染色清晰，结构保存完好；剩余沉渣做包埋后常规石蜡切片，增加了细胞量，避免细胞涂片由于细胞量少，造成漏诊现象。

《阿克曼外科病理学》中提到腹水细胞学诊断存在两个最困难的问题，①反应性间皮和肿瘤性间皮的鉴别，②恶性间皮瘤与转移癌的鉴别。并指出免疫组化应用于细胞学标本，以期提高诊断的准确性[5-6]。诊断误区常常在于将反应性改变的间皮细胞误判为恶性细胞，因此，诊断转移恶性细胞的关键是鉴别反应性间皮细胞。转移瘤细胞一般都具有恶性的基本特征，它们是"长着恶性面孔的外来者"，周围常能见良性的间皮细胞；当反应性间皮细胞酷似转移瘤细胞时，需借助其他手段（如免疫化学染色）进行鉴别[7-9]。由于石蜡切片可以连续大量切片及长期保存的特性，可加做免疫组化及特殊染色，无红细胞背景干扰，有利于肿瘤诊断和鉴别诊断，提高了诊断依据及准确性。

综上所述，本方法避免了传统涂片的不足，阳性检出率高，试剂配制简单，成本低，具有较高的应用价值，值得推广，但在操作过程中需要注意：①标本离心涂片后，立即用酒精灯烤干冷却后固定，固定时间不少于10 min，否则影响染色效果。②冰醋酸浓度不宜过高，低渗的冰醋酸才能去除红细胞。③所有玻片必须清洁干净，必要时可用防脱载玻片。

参考文献：

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[3]赵杰，周淑芬.冰醋酸在浆膜腔积液、脑脊液细胞学检查中的应用[J].国际检验医学杂志，2012，33（8）：1023.

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[9]Agarwal PK.Cytologic examination of hemorrhagic fluid by capillary centrifugation： a new technique[J].Acta Cytologica，2009，53（5）：527-532.编辑/张燕