多脂鳞伞菌丝体多糖抗肿瘤活性研究

多脂鳞伞［Pholiota adiposa(Fr.) Quel.］菌丝体多糖溶液给S-180荷瘤小鼠连续灌胃10 d后，测定对荷瘤小鼠抑瘤率、碳粒廓清指数、小鼠外周血肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-2(IL-2)含量的影响。结果发现，多脂鳞伞菌丝体多糖对荷瘤小鼠肿瘤的抑瘤率为39.54％，并可提高小鼠碳粒廓清指数，血清中IL-2和TNF-α的含量也明显提高。结果提示，多脂鳞伞菌丝体多糖抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长可能与增强宿主的免疫功能相关。

碳粒廓清指数；白介素-2；肿瘤坏死因子-α；多脂鳞伞；多糖

S646.110A

多脂鳞伞［Pholiota adiposa(Fr.) Quel.］又名柳蘑、黄蘑、黄伞，属担子菌亚门（Basidiomycotina），伞菌目(Agaricales)，球盖菇科（Strophariaceae），鳞伞属(Pholiota)，是一种食药兼用真菌。多脂鳞伞多糖可预防葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎杆菌和结核杆菌感染^[1，2] ，对小白鼠S-180肉瘤和艾氏腹水癌等有较强的抑制作用。

现代研究表明，白介素-2(IL-2)主要由激活的Th1淋巴细胞产生，可诱导T细胞增殖和分化，产生杀伤细胞，激活自然杀伤细胞（NK细胞）和淋巴因子激活杀伤细胞（LAK细胞），参与肿瘤免疫治疗。小鼠外周血肿瘤坏死因子(TNF)则作为吞噬细胞产生的一种多肽，既可直接杀伤肿瘤细胞，也可通过活化机体的免疫功能发挥抗肿瘤的作用。本实验研究多脂鳞伞菌丝体多糖对小鼠S-180肉瘤的抑制作用以及增强免疫功能的作用，旨在探讨多脂鳞伞菌丝体多糖抗肿瘤的作用机制。

1 材料与方法

1．1材料

1.1.1菌种

多脂鳞伞菌株(AS 5.170)购自中国科学院微生物研究所菌种保藏中心。

1.1.2肿瘤细胞株

S-180肿瘤细胞株由黑龙江省肿瘤防治研究所提供。

1.1.3实验动物

昆明种小鼠86只，雌雄各半，体重20～24 g，由佳木斯大学实验动物中心提供（许可证号：黑动字第99102001号）。

1.1.4主要试剂和仪器

环磷酰胺为江苏恒瑞医药股份有限公司产品，印度墨汁为青岛海博生物制剂公司产品，TNF-α试剂盒和IL-2试剂盒为北京福瑞生物公司产品。

1.2方法

1.2.1多脂鳞伞菌丝体多糖的制备

液体培养基(％)：葡萄糖3，酵母粉0.5，K2HPO4 0.3，MgSO4 0.15，自然pH。培养基装量为100 mL/300 mL摇瓶。按10%（v/v）的接种量接入多脂鳞伞菌丝体液体菌种；摇瓶置于旋转式恒温水浴摇床上，150 r/min、26 ℃培养7 d。过滤得菌丝体，将其干燥。菌丝体干粉95 ℃热水浸提2 h，过滤，得上清液，残渣重复提取2次，滤液合并、浓缩，加1倍体积的氯仿∶正丁醇(5∶1)脱蛋白3次，再加三倍体积的95%乙醇沉淀, 5740 ×g离心，收集沉淀，乙醚洗涤，冷冻干燥得多脂鳞伞菌丝体粗多糖。

1.2.2荷瘤小鼠模型制备

S-180腹水瘤细胞以无菌方法接种于6只小鼠腹腔内，每只小鼠接种浓度为1×1013个/mL 的S-180细胞 1 mL，腹腔传两代后，选取腹腔内接种9 d、生长良好的腹水型S-180荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死，无菌抽提腹水，用生理盐水稀释至细胞浓度为1×107个/mL，接种于78只小鼠右后肢腹股沟皮下，每只接种0.2 mL。

赵永勋，等：多脂鳞伞菌丝体多糖抗肿瘤活性研究

1.2.3实验动物分组及给药方法

造模24 h后，将78只小鼠随机等份分成对照组、环磷酰胺组和多脂鳞伞菌丝体多糖组。对照组灌胃生理盐水0.3 mL，并腹腔注射生理盐水0.2 mL。环磷酰胺组灌胃生理盐水0.3 mL，并腹腔注射环磷酰胺（20 mg/kg·d）0.2 mL。多脂鳞伞菌丝体多糖组灌胃多脂鳞伞菌丝体多糖（400 mg/kg·d）0.3 mL，并腹腔注射生理盐水0.2 mL。连续给药10 d，每天1次。

1.2.4抑瘤率检测

末次给药24 h后处死小鼠，剥离瘤体，称重，计算抑瘤率。

抑瘤率(%)=(对照组瘤重一用药组瘤重)/对照组瘤重×100。

1.2.5碳粒廓清指数测定

取末次给药24 h后小鼠，按0.1 mL/10 g体重的量尾静脉注射稀释3倍的印度墨汁。2 min和l5 min后，分别从内毗静脉丛取血20 μL，加到2 mL Na2CO3溶液中，用紫外可见分光光度计测定在600 nm处的A值，以Na2CO3溶液作空白对照。小鼠取血后处死，取肝和脾脏称重，计算廓清指数（k）和吞噬指数（a）。

k= (logA2-logA15)/(t15一t2)；

a=体重/肝脾重×k1/3［3]

式中 A2 ：注射后2 min所取血样的吸光度；

A15：注射后15 min所取血样的吸光度；

t15-t2：为两次取血样的时间差。

1.2.6外周血IL-2和TNF-α的测定

取末次给药24 h后小鼠，摘眼球取血，全血室温静止2 h后，取血清测定IL-2和TNF-α含量^[4]。

1.2.7统计数据的处理

实验数据以均数加减标准差（χ±S）表示。采用SPSS 10.0统计软件进行统计，样本均数比较采用t检验。

2 结果与分析

2.1多糖对荷瘤小鼠抑瘤率的影响

多脂鳞伞菌丝体多糖和环磷酰胺对S-180荷瘤小鼠的抑瘤率分别是39.54%和47.53%（表1），与对照组比较差异显著（P<0.05）。

表1 多脂鳞伞菌丝体多糖对荷瘤小鼠的抑瘤率1）

Table 1 Effect ofP. adiposapolysaccharide on tumor weight1）

n平均瘤重Mean wt of tumor（g）抑瘤率Inhibition rate（%）

对照组Control82.63±0.44

环磷酰胺组Cyclophosphamide81.38±0.23*47.53

菌丝体多糖组Polysaccharide81.59±0.24*39.54

1）与对照组比较，*P<0.05 Significant(*P<0.05)compared with control

2.2多糖对S-180荷瘤小鼠碳粒廓清指数的影响

从表2中可以看出，环磷酰胺和多脂鳞伞菌丝体多糖对S-180荷瘤小鼠碳粒廓清指数的影响，与对照组比较都有极显著差异（P<0.01），但前者的小鼠k和α值明显降低,后者的小鼠k和α值则明显升高。

2.3多脂鳞伞菌丝体多糖对S-180荷瘤小鼠外周血TNF-α和IL-2的影响

菌丝体多糖组血清IL-2的含量与对照组比较有极显著差异（P<0.01）（表3）；菌丝体多糖组与环磷酰胺组显著提高了血清TNF-α含量（P<0.05）。环磷酰胺IL-2的含量与对照组比较无差异。

3 讨论

多脂鳞伞菌丝体多糖可显著提高S-180荷瘤小鼠的k和α值,增加网状内皮细胞功能，从而提高荷瘤小鼠的免疫功能。

实验发现,多脂鳞伞菌丝体多糖可明显提高S-180荷瘤小鼠血清中的IL-2和TNF-α的分泌水平，IL-2是机体重要的免疫调节因子，在体细胞网络中起关键作用，如可诱导细胞毒T细胞（CTL）的分化，诱生LAK细胞。CTL和LAK是重要的杀瘤细胞，IL-2还可以诱生干扰素（IFN）的产生^[5]。TNF-α是迄今发现的抗肿瘤作用最强的细胞因子,可以通过多条途径杀伤肿瘤细胞以达到抗肿瘤作用，如TNF-α对肿瘤细胞直接的细胞毒性^[6];TNF-α能损伤瘤体周围的血管内皮组织,形成血栓,阻断肿瘤的血液营养供应,致使肿瘤组织出血、坏死,肿瘤组织高度空泡样变性^[7];TNF-α可以诱导肿瘤组织局部的炎症反应,增强粘附分子和IL-2受体的表达,增强白细胞的趋化作用,促进肿瘤细胞对白细胞的敏感性^[8],导致肿瘤发生坏死反应。本实验提示，多脂鳞伞菌丝体多糖抗肿瘤作用与荷瘤机体产生免疫因子相关。

卯晓岚.中国大型真菌［M］.河南:河南科学技术出版社,2000：248.

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唐庆九

注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。”