微生物快速鉴定技术的发展和应用

【摘要】 现代生物学发展迅速，传统的生物鉴定技术虽结果准确，但操作起来麻烦，所花费的时间较多，且需要耗费大量的人力物力，在现代科学技术大发展的背景下，微生物鉴定技术得到了迅猛发展，有些技术已广泛应用于实验，但一部分技术因成本高、价格贵，不易为基层所接受。

【关键词】 微生物；快速鉴定技术；发展；应用

文章编号：1004-7484（2013）-02-0892-02

传统的微生物检测技术及方法已不能适应微生物学的迅速发展，生化鉴定或者血清学分型是传统微生物检测技术之一，尽管这些方法具有极高的准确性，但操作起来极其繁琐，实验所用的时间较长，且需要大量的人员参与，耗时耗力，而且对病原菌的检测的难度相当大。为此，微生物学正力求寻求一种快速、准确、省时、省力且省成本的快速检验方法。目前，伴随微生物学的迅猛发展，相关技术得以体现和应用，现概括如下。

1 分子生物学技术

1.1 PCR PCR检测技术是指通过将合成的DNA片段变性-延伸-复性的反复性操作，使得DNA模板以百倍的数量增长，并对DNA产物的荧光条带加以检测，从而确定微生物的种类。此种技术敏感性极高，且在某种程度上具有特异性，从理论上看，它可以检出一个细菌的拷贝基因，所以，此种技术的优点之一便是有效缩减了增菌时间。而且，此种检测技术能够对大肠杆菌、肉毒杆菌、李氏杆菌以及沙门杆菌等病原菌进行定量检查，一定程度上扩大了检测范围。尽管荧光定量PCR技术目前已被认可，其检测的准确性较高，但价格昂贵，成本偏高，在基层难以开展。

1.2 基因探针技术 对于基因探针技术，我们又可称之为分子杂交技术，其原理主要是利用DNA分子的高度精确性探查某一特异性DNA序列。对于此种技术的运用首要的就是要对探针进行标注。基因探针技术运用起来快速敏捷，且精确度较高。但是此种技术也有它的不足之处，如果要对某一种菌进行检测，相应的，需制备一种探针，在鉴别上还有局限，有待进一步发展。

1.3 基因芯片技术 利用微电子或者微加工技术将成千上万的基因寡核苷酸有序地排列在纤维膜或者硅片上，由此而得到某种信息的技术，我们称之为基因芯片技术。此种技术的运用需结合以上PCR以及基因探测技术等，并与寡核苷酸点混合，再利用扫描仪对荧光分布模式进行观察和分析，最后确定检测样品上的微生物。因可以一次大量使用探针，所以对样品的检测也可以一次性多个，从而缩减了检测时间，简化了检测步骤。就目前来看，虽然此种技术具有很好的发展前景，但其价格昂贵，灵敏度还有待提高，且分析能力较差，还需改进。

2 免疫学技术

免疫学技术主要是指对抗原和抗体的结合反应作出观察，并通过免疫放大技术对细菌加以鉴别，此种技术的灵敏度较高，且检测迅速，检测效果好，没有过高的技术要求，目前已被广泛运用。

2.1 乳胶凝集反应 乳胶凝集反应是指人工大分子乳胶颗粒标记抗体与待测抗原发生了凝集反应，且此种反应肉眼可见，从而可以对目标病原微生物或者毒素进行检测。

2.2 酶联免疫法（ELISA） 酶联免疫法是指将抗原或者抗体与某种酶连接成酶标抗原或者抗体。具体测定时，让受检标本或者酶标抗原（抗体）按不同的步骤与固相载体表面的抗原（抗体）起反应，并将起反应后的复合物与其他物质分开。再加入酶反应的底物，此时底物会被酶催化成有色产物，产物的量与标本中受检物质的量存在相关性，我们可以观察颜色的变化，从而对检测物进行分析。酶具有极高的催化频率，我们可故意放大反应效果，从而抬高技术的灵敏度。

2.3 免疫磁性分离法 将抗体偶联于磁性颗粒的表面，此种结合具有一定的磁响应性，从而可以对免役磁性微球与待检测的混合物进行共同培养，此种方法我们称之为免疫磁性分离法。经过抗元抗体的反应，免疫性微球与待检测的微生物的靶物质相结合，此时通过一个磁场装置的整合，微生物滞留在磁场中，从而得以将微生物分离。

3 选择、鉴定用培养基法

选择鉴定用培养基法是通过将生化反应底物以及酶反应底物等加入培养基，从而将分离与鉴定快速完成。此种方法操作简便，可接受性强，值得应用和推广。

4 快速测试片法

将培养基或者显色物质附着在纸片或者胶片上面，观察微生物的生长、显色，最终测定食品中的微生物。对于纸片的选择，目前较多使用的是滤纸，除此之外，美国3M公司生产的PF（Petrilm）试纸也颇受欢迎。采用纸片法，可检测出包括大肠菌群、沙门菌、霉菌以及葡萄球菌等在内的各种菌类。此种方法成本低，使用简便，携带方便，目前应用较广泛。

5 细菌直接计数法

细菌直接计数法主要包括两种，即流式细胞仪（FCM）和固相细胞计数（SPC）法。流式细胞计数灵敏度较高，可同时进行定量和定性分析。目前已广泛应用于细菌总数以及大肠埃希氏菌等的检测。

6 全自动微生物分析系统（AMS）

全自动微生物分析系统介入了现代计算机技术，它将现代计算机技术与微生物检测技术相结合，进行自动微生物检测。它完全脱离了微生物的分离培养与纯化过程，直接对样品进行检测。此种技术操作简便、迅速，且结果准确，唯一不足是价格昂贵。

参考文献

[1] 翟旭，孙靖靖.微生物快速检测方法及应用进展[J].辽宁医学院学报，2008，06：0564-567.

[2] 高军秀，潘世珍，关鹤玲.微生物快速检测方法及应用进展[J].医学信.