深圳市南山区外来工青壮年猝死尸检病理分析

[摘要] 目的 在对深圳市南山区青壮年外来工猝死流行病学特征进行调查的基础上，进一步对心源性猝死病例心肌缝隙连接蛋白43（Cx43）检测，观察其在心肌的分布特征，探讨其分布变化与猝死的关联性。 方法 筛选尸检案例30例，分为冠心病心肌梗死组（5例）、心脏传导系统病变组（5例）、肥厚型心肌病组（6例）及对照组（14例）。采用免疫组织化学染色和图像分析技术对不同组别Cx43阳性单位进行定量检测，分析其阳性表达在各组间的差异，所得数据行统计学分析。 结果 冠心病心肌梗死组、心脏传导系统病变组和肥厚型心肌病组共占猝死患者的53.3%，这3组患者Cx43染色在心肌闰盘处明显减弱或缺失，胞质内散在或心肌边缘处可见少量着色；对照组未见明显变化。 结论 冠心病心肌梗死组、心脏传导系统病变组和肥厚型心肌病组占猝死较高比例，且这3组患者Cx43分布发生了变化，推测是猝死性心律失常的结构基础。

[关键词] 冠心病；猝死；缝隙连接蛋白43；心肌闰盘；心律失常

[中图分类号] R361+.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）08（a）-0013-03

猝死从广义上讲凡外表似乎健康的人或因某种非致命性疾病治疗过程中的人因其内在病变（器质性或非器质性）而发生急速的、意外的死亡，统称为猝死。猝死的原因很多，临床上以心血管疾病所引起的猝死最为常见而重要，称为心源性猝死，其直接的致命因素为心搏骤停。而缝隙连接蛋白43（connexin 43，Cx43）是构成心室细胞间缝隙连接（gap junetion，GJ）通道最主要的蛋白，也是心室肌细胞间电流的主要导体[1-2]。有文献报道，Cx43是冠状动脉阻塞后心肌梗死范围大小的决定因素之一[3]。本研究采用免疫组织化学染色的方法，探讨冠心病心肌梗死组、心脏传导系统病变组、肥厚型心肌病组和对照组，不同组别间Cx43的分布变化，以期揭示Cx43在青壮年猝死中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

本研究对1999～2009年深圳市南山公安局法医委托南山医院病理科解剖外来工青壮年猝死病例30例，其中男20例，女10例，年龄20～63岁。将30例猝死患者分为4组：冠心病心肌梗死组（5例），冠状动脉硬化面积均>50%，为年龄27～47岁的男性，心脏重280～540 g，左心室壁厚1.5～2.2 cm；心脏传导系统病变组（5例），未见冠状动脉硬化，男4例，女1例，年龄21～60岁，心脏重200～360 g，左心室壁厚1.5～2.5 cm；肥厚型心肌病组（6例），未见冠状动脉硬化，男4例，女2例，年龄21～53岁，心脏重400～530 g，左心室壁厚1.5～3.0 cm；对照组（14例），其中脑积水、大叶性肺炎、胸腺淋巴体质、肺动脉栓塞、脾破裂、肝破裂各1例，过敏性休克、羊水栓塞、脑出血、子宫破裂各2例，男7例，女7例，年龄20～63岁，心脏重210～420 g，左心室壁厚1.5～2.5 cm。

患有心脏性疾病（冠心病心肌梗死组、心脏传导系统病变组和肥厚型心肌病组）共16例，占53.3%。

1.2 方法

1.2.1 组织取材及切片制备 冠心病心肌梗死组患者取病灶及周边心肌组织一块，其余各组取左心室前壁心肌组织一块，10%甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋、切片（厚5 μm），分别进行HE染色和免疫组织化学染色Cx43。

1.2.2 主要试剂及方法 Cx43通用型SP试剂盒：北京中杉-金桥生物技术有限公司，产品编号为SP-9000。抗生物素蛋白链菌素-生物素标记法（labelled streptavidin-biotin，LSAB），具体操作步骤同说明书。

1.2.3 图像分析及统计学处理 应用图像半自动分析系统，首先对各组每张Cx43免疫组织化学染色玻片进行图像采样，每张玻片随机挑选心肌闰盘处局部阳性单位5个视野400×，采用随机场图割法[4]寻找Cx43边缘处的轮廓，图割法将图像分割转化为像素标记问题，测量局部阳性反应产物平均灰度及相应背景的平均灰度，计算各例阳性产物校正灰度值，求得局部阳性单位（local positive unit，LPU）值，结果以x±s表示。所得数据采用SPSS 11.0软件进行处理，多组间比较应用ANOVA进行方差分析，两两间比较应用SNK法进行q检验。

2 结果

2.1 HE染色结果

冠心病心肌梗死组：大部分心肌纤维呈波浪状，可见心肌断裂、肿胀、嗜酸性变，伴少量中性粒细胞浸润。冠状动脉硬化狭窄>50%，传导组织未见异常。心脏传导系统病变组：可见心肌断裂、肿胀，心脏传导系统见脂肪浸润。肥厚型心肌病组：心肌细胞肥大、排列紊乱伴断裂，传导组织未见异常。对照组：心肌细胞横纹清晰，细胞核致密呈蓝色，未见心肌梗死、炎症细胞浸润及冠状动脉和传导组织异常。（图1）

2.2 Cx43免疫组织化学染色结果

冠心病心肌梗死组、心脏传导系统病变组和肥厚型心肌病组均见Cx43染色在心肌闰盘处，明显减弱或缺失，胞质内散在或心肌边缘处可见少量着色。对照组心肌Cx43染色在心肌闰盘处呈条状分布，与心肌纵轴垂直。（图2）

2.3 图像分析及统计学处理结果

图像分析及统计学处理、检测各组Cx43 LPU，冠心病心肌梗死组、心脏传导系统病变组、肥厚型心肌病组与对照组差异有统计学意义（P<0.05），3组两两间差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

3 讨论

3.1 南山区青壮年外来工的猝死特征

通过以上的统计，可以发现南山区青壮年外来工猝死以心源性猝死病例（冠心病心肌梗死组、心脏传导系统病变组和肥厚型心肌病组，53.3%）比例较高。国内外报道[5-7]，冠心病是心源性猝死最常见的原因。许海霞等[8]研究表明，心源性猝死患者的存活率很低，因此，对该类疾病应采取预防为主，防治相结合的方针。

3.2 Cx43在猝死发生中的机制

Sutton等[9-10]报道，心肌梗死后Cx43重构是室性心律失常发生的主要原因，并推测可能也是心肌梗死后心脏性猝死发生的主要机制。作为一种磷酸化蛋白，Cx43磷酸化状态决定着其自身活性以及缝隙连接通道的开闭[11]。基础状态下大部分Cx43处在磷酸化状态，但在病理生理状态及化学诱导剂的作用下，特别是心肌缺血时可使Cx43快速脱磷酸化从而导致电冲动脱耦联。国内报道[12-14]，在冠心病猝死伴心肌梗死中，心肌梗死病灶区域及其邻近区域Cx43染色在心肌闰盘处，明显减弱或缺失，胞质内散在或心肌边缘处可见少量着色。本研究结果发现不但在冠心病心肌梗死组，而且在心脏传导系统病变组和肥厚型心肌病组Cx43的分布变化与陈林等[12]报道的结果相似，可以推测，这3组患者均有相似的猝死性心律失常的结构基础。

目前，抗心律失常的药物主要是作用于膜离子通道，本身具有致心律失常的作用，不能有效降低死亡率，临床应用受到很大的限制。对冠心病心肌梗死组患者以Cx43为作用靶点，近年合成的抗心律失常多肽（antiarrhythmic peptide，AAP10），通过上调Cx43的磷酸化水平而发挥抗心律失常作用[15]。对于肥厚型心肌病组患者用同类的药物治疗和预防心律失常是否会取得一定的效果值得今后进一步研究。

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（收稿日期：2013-04-10 本文编辑：郭静娟）